Грамын будгийн аргыг хийх 3 арга

2024 Зохиолч: Jason Gerald | [email protected]. Хамгийн сүүлд өөрчлөгдсөн: 2023-12-16 11:28

Грамаар будах нь хурдан арга бөгөөд эд эсийн дээжинд бактери байгаа эсэхийг харах, эсийн хананы химийн болон физик шинж чанарыг үндэслэн нянг грам эерэг ба грам сөрөг гэж ангилахад ашигладаг. Грам толбыг бараг үргэлж бактерийн халдварыг оношлох эхний алхам болгон ашигладаг.

Энэхүү будгийн техникийг Данийн эрдэмтэн Ханс Кристиан Грам (1853 - 1938) нэрээр нэрлэжээ. Энэ техникийг 1882 онд боловсруулж, 1884 онд ижил төстэй эмнэлзүйн шинж тэмдэг бүхий хоёр төрлийн бактериудыг ялгах арга болгон хэвлүүлжээ: Streptococcus pneumoniae Streptococcus pneumoniae). Pneumococci) ба бактери Klebsiella pneumoniae.

Алхам

3 -ийн 1 -р арга: Микроскопын слайдыг бэлтгэх

Алхам 1. Лабораторид ажиллахад бэлтгэ

Шинжилгээ хийж буй дээжийг нянгаар бохирдуулахгүйн тулд бээлий, урт үстэй зангиа өмс. Ажлын талбайг утааны тагны доор эсвэл агааржуулалт сайтай өөр газар цэвэрлээрэй. Bunsen шарагчийг шалгаж эхлэхээс өмнө микроскоп зөв ажиллаж байгаа эсэхийг шалгаарай.

Алхам 2. Микроскопын шилэн слайдыг ариутгана

Шилэн хальс бохир байвал савантай усаар угааж тос, шороог зайлуулна. Слайдыг этанол, шил цэвэрлэгч эсвэл лабораторийнхоо хэрэглэдэг өөр аргаар цэвэрлээрэй.

Алхам 3. Дээжийг шилэн слайд дээр байрлуулна

Эмнэлзүйн дээж дэх бактери, эсвэл петрийн аяганд ургадаг бактерийн соёлыг тодорхойлоход туслахын тулд та Грамын будгийн техникийг ашиглаж болно. Хамгийн сайн үр дүнд хүрэхийн тулд дээжийн нимгэн цохилт дээр Грам толбо ашиглана уу. Хуучин бактери нь эсийн ханыг гэмтээж, Грамын будалтанд хариу өгөхгүй байж болзошгүй тул 24 -өөс доош насны дээжийг ашиглахыг зөвлөж байна.

Хэрэв эд эсийн дээж хэрэглэж байгаа бол шилэн слайд дээр 1-2 дусал дуслаарай. Слайд дээр жигд тарааж дээж цацах нимгэн давхарга үүсгэн нөгөө ариутгасан шилэн слайдны ирмэгийг ашиглан гулсуулна. Дараагийн алхамыг хийхээс өмнө хатаана.
Хэрэв та петри тавагнаас бактери авч байгаа бол Бунзен шарагч дахь тарилгын хүрдийг гэрэлтэх хүртэл ариутгаад хөргөнө. Ариутгасан усыг слайд дээр дусааж, ариутгаад дахин хөргөнө. Үүний дараа зөөлөн хутгана.
Шөлд бэлтгэсэн бактериудыг вентекс ашиглан дахин хутгаж, дараа нь ус нэмэлгүйгээр тарилгын гогцоотой хамт авах ёстой.
Хэрэв танд арчдасны дээж байгаа бол (ихэвчлэн хөвөн үзүүртэй жижиг бариулаар хийдэг) арчдас дээр хүрч, зөөлөн эргүүлээрэй.

Алхам 4. Бага зэрэг өндөр температур нь сайн т рхэц авч чаддаг

Дулаан нь нянг гулсуурын дээд талд байлгадаг тул будах явцад амархан уусдаггүй. Бунзен шарагч дээр слайдыг хоёроос гурван удаа хурдан дарна уу эсвэл цахилгаан халаагуураар халаана. Хэт халах хэрэггүй, дээж гэмтэх магадлалтай. Хэрэв та Bunsen шарагч ашиглаж байгаа бол энэ нь том улбар шар дөлийн оронд жижиг боловч цэнхэр дөл байх ёстой.

Эсвэл метанолоор т рхэц хийж, хуурай т рхэцэнд 1-2 дусал метанол нэмж, задгай агаарт үлдээсэн слайд дээрх метанолыг хатаана. Энэхүү техник нь эсийн эвдрэлийг багасгаж, слайд дүрсний цэвэр дэвсгэрийг хангадаг

Алхам 5. Слайдыг будах тавиур дээр байрлуул

Будгийн тавиур нь металл, шилэн эсвэл гүехэн хуванцар хавтангаар хийгдсэн бөгөөд дээд тал нь зөөлөн торон доторлогоотой байдаг. Слайдыг эдгээр торны дээд талд байрлуул, ингэснээр таны хэрэглэж буй шингэнийг тавиур руу юүлнэ.

Хэрэв танд будах тавиур байхгүй бол хуванцар тавиур дээр слайд байрлуулж мөсөн шоо хэвлэх боломжтой

3 -ийн 2 -р арга: Грам толбо хийх үйл явц

Алхам 1. Болор ягаан өнгийн шингэнийг түрхэц дээр хийнэ

Пипеткээр нянгийн дээжийг хэд хэдэн дусал болор ягаан өнгөөр шүршинэ. Үүнийг 30-60 секундын турш үлдээгээрэй. Болор ягаан (KV) нь усан уусмалд KV+ ба хлорид (Cl-) ионуудад хуваагддаг. Эдгээр ионууд нь грам эерэг ба грам сөрөг бактерийн эсийн хана, эсийн мембранд нэвтэрдэг. KV+ ион нь бактерийн эсийн сөрөг цэнэгтэй бүрэлдэхүүн хэсгүүдтэй харилцан үйлчлэлцэж, эсүүдэд ягаан өнгө өгдөг.

Олон лабораторид хур тунадаснаас урьдчилан сэргийлэх зорилгоор аммонийн оксалат агуулсан "Хакер" болор ягаан өнгийг ашигладаг

Алхам 2. Болор ягаан өнгийг зөөлөн угаана

Слайдыг хазайгаад угаагч сав ашиглан жижигхэн нэрмэл эсвэл цоргоны усыг гулсуур дээр цацна. Ус түрхэцийн гадаргуу дээгүүр урсах ёстой бөгөөд түрхэц дээр шууд цацаж болохгүй. Хэт их угааж болохгүй. Энэ нь грам эерэг бактерийн толбыг арилгах боломжтой.

Алхам 3. Т рхэцийг иодоор угаагаад дараа нь зайлна

Т рхэцийг иодоор угаахын тулд дусаагуур ашиглана уу. Үүнийг дор хаяж 60 секундын турш байлгаад дараа нь дээр дурдсантай адил аргаар сайтар зайлна. Иод нь сөрөг цэнэгтэй ион хэлбэрээр КВ+ -тэй харилцан үйлчлэлцэн Кристал ягаан ба иодын хооронд том нийлмэл цогцолбор (CV-I нийлмэл цогцолбор) үүсгэнэ.) эсийн дотор ба гадна давхаргад. Энэхүү нэгдлүүдийн цогцолбор нь толбо бүхий хэсгүүдэд эсийн доторх болор ягаан өнгийг хадгалах болно.

Иод бол идэмхий бодис юм. Амьсгалах, залгих, арьсанд хүрэхээс зайлсхий

Алхам 4. Өнгөт цайруулагч нэмж, дараа нь хурдан зайлна

Энэхүү чухал алхамд ихэвчлэн ацетон ба этанолын 1: 1 харьцаатай хольцыг ашигладаг бөгөөд үүнийг цаг тухайд нь нарийн хийх ёстой. Слайдыг тодорхой өнцгөөр байрлуулаад дараа нь угаах зориулалттай усанд ягаан өнгө харагдахгүй болтол өнгө цайруулагч нэмнэ. Энэ нь ихэвчлэн 10 секундээс бага хугацаа шаардагддаг, эсвэл цайруулагч нь ацетон их хэмжээгээр агуулдаг бол үүнээс ч бага хугацаа шаардагддаг. Энэ алхамыг даруй зогсооно уу, эс тэгвээс будаг нь грам эерэг ба сөрөг эсүүдээс болор ягаан туяаг ялгаруулж, будгийн процессыг давтах ёстой. Илүүдэл өнгөт цайруулагчийг өмнөх техник ашиглан нэн даруй зайлж угаана.

Цэвэр ацетон (95%+) -ийг орлуулан хэрэглэж болно. Ацетон хэдий чинээ их хэрэглэх тусам цайруулагч нь хурдан ажиллах тул та цаг хугацааг анхаарч үзэх хэрэгтэй.
Хэрэв та энэ алхамын цагийг хянахад асуудалтай байгаа бол өнгөт цайруулагчийг дусал дуслаарай.

Алхам 5. Эсрэг будгийг түрхэц дээр түрхээд дараа нь зайлна

Өнгө алдсан (өнгөө алдсан) бактери, өөрөөр хэлбэл грам сөрөг бактери, ягаан эсвэл улаан өнгөөр будаж, грам сөрөг ба грам эерэг бактериудын хоорондох ялгааг нэмэгдүүлэхийн тулд ихэвчлэн сөрөг сафранин эсвэл фуксиныг хэрэглэдэг. дараа нь зайлж угаана.

Фуксин нь Haemophilus spp, Legionella spp гэх мэт олон грам сөрөг бактериудыг эрчимтэй будна. Энэ арга нь эхлэгчдэд тохиромжтой

Алхам 6. Слайдыг хатаана

Та тэдгээрийг задгай агаарт хатааж хатааж болно, эсвэл энэ зорилгоор борлуулсан библи цаас ашиглан хатааж болно. Грамыг будах үйл явц дууссан.

3 -ийн 3 -р арга: Будгийн үр дүнг шалгах

Алхам 1. Гэрлийн микроскопыг бэлтгэ

Слайдыг микроскопын доор байрлуул. Бактери нь хэмжээнээсээ хамаарч өөр өөр байдаг тул шаардагдах нийт томруулалт 400x -аас 1000x хооронд хэлбэлздэг. Илүү тод дүр зургийг гаргахын тулд усанд дүрэх тос бүхий объектив линз хийхийг зөвлөж байна. Усанд дүрэх тосыг гулсуур дээр дусааж, бөмбөлөг үүсэхээс урьдчилан сэргийлэхийн тулд дуслах үед хөдөлгөөн хийхээс зайлсхий. Микроскопын линзний бариулыг хөдөлгөж, объектив линз нь наалдаж, тосонд хүрнэ.

Газрын тос шингээлтийг зөвхөн тусгай зориулалтын линз дээр хэрэглэж болох бөгөөд "хуурай" линз дээр ашиглах боломжгүй

Алхам 2. Грам эерэг ба грам сөрөг бактериудыг тодорхойлохыг хичээ

Слайдыг гэрлийн микроскопоор шалгана уу. Грам эерэг бактери нь ягаан өнгөтэй харагддаг, учир нь болор ягаан эсийн зузаан хананд наалддаг. Грам сөрөг бактери нь ягаан эсвэл улаан өнгөтэй болно.

Хэрэв дээж хэт зузаан байвал үр дүн нь хуурамч эерэг байж болно. Үр дүн зөв эсэхийг шалгахын тулд бүх грам эерэг бактериудыг харуулсан бол шинэ дээжийг будна.
Хэрэв та хэт их өнгө цайруулагч хэрэглэвэл үр дүн нь хуурамч сөрөг байж болно. Үр дүн зөв эсэхийг шалгахын тулд бүх грам сөрөг бактериудыг харуулсан бол шинэ дээжийг будна.

Алхам 3. Таны харж буй үр дүнг лавлагааны зурагтай харьцуулж үзээрэй

Хэрэв та бактери хэрхэн харагддагийг мэдэхгүй бол ихэвчлэн хэлбэр, грам толбо зэргээр ангилсан лавлах зургийн цуглуулгыг судлаарай. Та мөн онлайн мэдээллийн санг [Үндэсний бичил биетний эмгэг төрүүлэгчдийн мэдээллийн сан, зураг дээрх бактери, бусад олон онлайн сайтуудаас үзэх боломжтой. Оношилгоог хөнгөвчлөхийн тулд нийтлэг тохиолддог эсвэл оношлоход чухал ач холбогдолтой бактерийн жишээг Грамын хэлбэр, хэлбэрийн дагуу ангилдаг.

Алхам 4. Грам эерэг бактериудыг хэлбэр дүрс дээр нь үндэслэн тодорхойлох

Микроскопоор бактериудыг хэлбэрээс нь хамааруулан ангилдаг бөгөөд ихэвчлэн кокки (бөмбөрцөг хэлбэртэй) эсвэл саваа (цилиндр хэлбэртэй) гэж ангилдаг. Грам эерэг бактери (ягаан өнгөтэй) хэлбэрийн дагуу жишээг энд харуулав.

Грам эерэг кокс ихэвчлэн стафилококк (бүлгийн коккийг хэлнэ) эсвэл стрептококк (хэлхээний кокк гэсэн утгатай).
'Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Listeria зэрэг грам эерэг саваа. Саваа бактери Actinomyces spp. ихэвчлэн салбар эсвэл судалтай байдаг.

Алхам 5. Грам сөрөг бактериудыг тодорхойлох

Грам сөрөг бактериудыг (ягаан өнгөтэй) ихэвчлэн гурван бүлэгт ангилдаг. Кокки нь бөмбөрцөг хэлбэртэй, саваа нь урт, нимгэн, харин коккоид саваа нь дунд байдаг.

Грам сөрөг кокс Хамгийн түгээмэл нь Neisseria spp юм.
Грам сөрөг саваа Жишээ нь: E. coli, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, Serratia, Proteus, Salmonella, Shigella, Pseudomonas болон бусад. Vibrio cholerae -ийг ердийн иш эсвэл нугалсан иш гэж үзэж болно.
Грам сөрөг "coccoid" (эсвэл "coccobacilli") саваа бактери Жишээлбэл, Бордетелла, Бруцелла, Гемофилус, Пастерелла

Алхам 6. Үр дүн холилдсон эсэхийг сайтар шалгаарай

Зарим бактериудыг эсийн хананы хэврэг байдал, лав шинж чанараас шалтгаалан нарийн будахад хэцүү байдаг. Эдгээр бактериуд нь нэг эсэд эсвэл нэг түрхэц дэх өөр эсүүдийн хооронд нил ягаан эсвэл ягаан өнгийн хольцыг харуулдаг. 24 цагаас дээш настай бактерийн дээжүүд энэ асуудлыг харуулдаг боловч дээж авах насны аль ч үед будахад хэцүү бактерийн төрөл зүйл байдаг. Эдгээр бактериудыг тодорхойлохын тулд хүчил түрхэх, бактерийн өсгөвөрт ажиглалт хийх, TSI өсгөвөрлөх орчин эсвэл генетикийн туршилт хийх зэрэг илүү нарийн мэргэжлийн туршилтыг шаарддаг.

Actinomyces, Arthobacter, Corynebacterium, Mycobacterium, and Propionibacterium spp. бүгд грам эерэг бактери боловч ихэнхдээ тунгалаг буддаггүй.
Treponema, Chlamydia, Rickettsia spp зэрэг жижиг, нарийхан бактериуд. Грамын аргаар будахад хэцүү.

Алхам 7. Үлдсэн хэрэглээний болон тоног төхөөрөмжийг хаях

Энэхүү хог хаягдлыг зайлуулах журам нь лабораториудад харилцан адилгүй бөгөөд ашигласан материалаас хамаарна. Ихэвчлэн будах тавиур дахь шингэнийг аюултай хог хаягдал гэж тэмдэглэсэн саванд хаядаг. Слайдыг 10% -ийн цайруулагч уусмалд дүрээд дараа нь хурц саванд хийнэ.

Зөвлөмж

Грамын будгийн үр дүн дээж сайн байвал л сайн байх болно гэдгийг санаарай. Өвчтөнд сайн дээж өгөх боломжтой байхын тулд тэдэнд мэдээлэх нь чухал юм (жишээлбэл, цэрний дээж авахын тулд нулимах, гүн ханиалгах хоёрын ялгаа).
Өнгө цайруулагч бодис болох этанол нь ацетоноос илүү удаан урвалд ордог.
Аюулгүй байдлыг хангахын тулд лабораторийн стандарт дүрмийг дагаж мөрдөх.
Хацрын арчдасыг ашиглаарай, учир нь түүнд грам эерэг ба грам сөрөг бактери байдаг. Хэрэв та зөвхөн нэг төрлийн бактери олж харсан бол хэт бага эсвэл хэт их цайруулагч хэрэглэж байж магадгүй.
Слайдыг бэхлэхийн тулд та модон хавчаар ашиглаж болно.

Анхааруулга

Ацетон ба этанол нь шатамхай бодис юм. Ацетон нь таны гарнаас тосыг арилгаж, таны арьс бусад химийн бодисыг шингээхэд хялбар болгоно. Бээлий өмсөж, болгоомжтой хэрэглээрэй.
Грамын толбо эсвэл эсрэг толбыг зайлахаас өмнө түрхэцийг хатаахыг бүү зөвшөөр.